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cPM小鼠模型構(gòu)建

cPM小鼠模型構(gòu)建

簡(jiǎn)要描述:
cPM小鼠模型構(gòu)建:cPM(心臟特異性過(guò)表達(dá)或敲除模型)小鼠的構(gòu)建是研究心臟疾病機(jī)制的重要工具,通常通過(guò)基因編輯技術(shù)(如Cre-loxP系統(tǒng))實(shí)現(xiàn)

更新時(shí)間:2025-06-26

訪問(wèn)量:222

廠商性質(zhì):其他

1. cPM小鼠模型構(gòu)建策略選擇

A. 心臟特異性啟動(dòng)子選擇

  • 常用啟動(dòng)子

    • αMHC(Myh6):成年心肌細(xì)胞特異性表達(dá)(胚胎期低表達(dá))。

    • ct*T(Tnnt2):胚胎期和成年期均高表達(dá)。

    • Nppa(ANF):心力衰竭時(shí)激活,可用于病理模型。

B. 基因操作方式

  • 過(guò)表達(dá)模型:將目標(biāo)基因與心臟啟動(dòng)子連接(如AAV9載體或轉(zhuǎn)基因小鼠)。

  • 條件性敲除(cKO):需結(jié)合Cre-loxP系統(tǒng)(如αMHC-Cre × floxed基因小鼠)。

  • 條件性激活(如GOI):利用Tet-on/off系統(tǒng)或Cre依賴(lài)的激活工具。


2.cPM小鼠模型構(gòu)建 技術(shù)流程

A. 載體構(gòu)建

  1. 克隆心臟啟動(dòng)子(如αMHC 5.5 kb片段)。

  2. 插入目標(biāo)基因(或sgRNA用于CRISPR編輯)。

  3. 添加報(bào)告基因(如GFP或LacZ)便于表型驗(yàn)證。

B. 小鼠品系生成

  • 轉(zhuǎn)基因小鼠:顯微注射載體至受精卵原核。

  • 基因敲除/敲入:CRISPR-Cas9或ES細(xì)胞打靶。

  • 條件性模型:需先獲得floxed小鼠(loxP位點(diǎn) flanking 目標(biāo)基因),再與心臟特異性Cre小鼠交配。

C. 品系驗(yàn)證

  • 基因型鑒定:PCR或測(cè)序確認(rèn)目標(biāo)基因整合。

  • 表達(dá)驗(yàn)證:qRT-PCR/Western blot檢測(cè)心臟特異性表達(dá)。

  • 功能評(píng)估:超聲心動(dòng)圖(Echo)、心電圖(ECG)、組織病理學(xué)(如Masson染色檢測(cè)纖維化)。


3. 常見(jiàn)問(wèn)題與優(yōu)化

A. 非特異性表達(dá)

  • 解決:驗(yàn)證啟動(dòng)子特異性(如分離肝、腦、骨骼肌組織排除泄漏表達(dá))。

  • 優(yōu)化:使用更嚴(yán)格的啟動(dòng)子(如ct**比αMHC胚胎期表達(dá)更強(qiáng))。

B. Cre毒性

  • αMHC-Cre:高表達(dá)可能導(dǎo)致心肌肥厚(需選擇低表達(dá)品系,如MerCreMer)。

  • 誘導(dǎo)型Cre(如他莫xi芬誘導(dǎo)的Cre-ERT2)可避免發(fā)育期影響。

C. 表型異質(zhì)性

  • 解決:維持遺傳背景一致(如回交至C57BL/6J 10代以上)。


4. 應(yīng)用示例

  • cPM過(guò)表達(dá)模型

    • 目標(biāo):研究心肌肥厚(如過(guò)表達(dá)calcineurin)。

    • 方法:αMHC啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)calcineurin轉(zhuǎn)基因小鼠。

  • cPM敲除模型

    • 目標(biāo):研究心臟代謝(如PPARα敲除)。

    • 方法:αMHC-Cre × PPARα-floxed小鼠。


5. 注意事項(xiàng)

  • 倫理審批:確保實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物福利規(guī)范(如3R原則)。

  • 對(duì)照設(shè)計(jì):同窩野生型(WT)和雜合子(HET)對(duì)照。

  • 表型分析時(shí)間點(diǎn):根據(jù)目標(biāo)疾?。ㄈ缧牧λソ吣P托栝L(zhǎng)期隨訪)。



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